PCR實驗室建設(shè)設(shè)計的送、排風設(shè)計及排放準則,PCR實驗室建設(shè)并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
(1)核心實驗室氣流組織應(yīng)采用頂送側(cè)排方式。
(2)送風口宜遠離生物安全柜等通風設(shè)備,避免氣流干擾。
(3)高效過濾排風口應(yīng)設(shè)計在實驗室內(nèi)污染最嚴重的區(qū)域,且為單向。
PCR實驗室建設(shè)的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。各個區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。需要嚴格的通風設(shè)計,若通風設(shè)計不合理,會使風速流向混亂,甚至危害人們健康。
PCR實驗室建設(shè)人流路徑與物流路徑設(shè)計要合理
進入實驗室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:公共清潔區(qū)——更衣間——緩沖間——污染實驗區(qū)。
工作人員退出實驗室的路徑為:污染試驗區(qū)——緩沖間——淋浴間——更衣間——公共清潔區(qū)。
PCR實驗室污染的預(yù)防與控制
PCR實驗室建設(shè)的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。
由于一旦發(fā)生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結(jié)果必須作廢,需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應(yīng)是預(yù)防,而不是排除。
PCR實驗室建設(shè)不可缺少的嚴格管理如以下幾點:
(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門;
(2)盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性;
(3)擴增產(chǎn)物分析區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源,廢液不能直接排放,需經(jīng)過污水系統(tǒng)處理后達標排放。用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等;
(4)擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護。完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。